长春花碱与NVP-BEZ235联合制剂诱导人肾肿瘤细胞凋亡活性的研究

    Vinblastine plus NVP-BEZ235inducing apoptosis of human renal tumor cells

      摘要
    • 摘要: 目的 作为成年人中最常见的肾癌，肾细胞癌对常规放疗和化疗均不敏感，因此急需研发新的治疗手段。长春花碱和NVP-BEZ235均用于多种癌症的治疗，但是其二者的联合治疗肾细胞癌的效果如何，仍有待研究。本文以Caki细胞系为模型，研究长春花碱与NVP-BEZ235联合制剂诱导人肾肿瘤细胞凋亡的活性及可能机制。方法 通过对人肾肿瘤细胞系Caki细胞系进行模拟处理（阴性对照）或者长春花碱、NVP-BEZ235以及长春花碱+NVP-BEZ235处理24 h后，收集细胞样品，分别通过Annexin V染色检测细胞凋亡情况；通过Western杂交检测Caspase-3以及Mcl-1蛋白表达水平，以及通过RT-PCR检测Mcl-1的RNA表达水平。结果 长春花碱和NVP-BEZ235单独使用时，并不能显著诱导Caki细胞凋亡，而长春花碱+NVP-BEZ235则可以凋亡细胞比例达到60%左右。进一步的浓度梯度实验表明，二者联合使用诱导凋亡的能力与长春花碱和NVP-BEZ235的浓度呈正相关。研究表明，长春花碱和NVP-BEZ235单独使用时，并不对Caspase-3的表达水平产生明显影响，而长春花碱+NVP-BEZ235联合使用时，Caspase-3的水平显著上调。对Mcl-1的检测发现，长春花碱和NVP-BEZ235单独使用和联合作用均未使Mcl-1的RNA水平产生明显变化。两种药物单独使用时，也不对Mcl-1的蛋白水平产生明显影响，但是联合使用时显著地降低了Mcl-1的蛋白表达水平。结论 长春花碱与NVP-BEZ235联合制剂能够诱导人肾肿瘤细胞凋亡，并且其诱导凋亡机制与上调Caspase-3水平以及下调Mcl-1水平相关。

       

      Abstract: Objective To study the activity of Vinblastine (VLB) plus NVP-BEZ235 in inducing the apoptosis of human renal carcinoma cells and underlying mechanisms.Methods Human renal carcinoma Caki cells were separately treated with VLB, NVP-BEZ235 and VLB+NVP-BEZ235 for 24 h, and apoptosis was determined by Annexin V staining, the expression levels of Caspase-3 and Mcl-1 proteins were detected by Western blotting and those of Mcl-1 mRNA by RT-PCR.Results VLB or NVP-BEZ235 alone did not induce apparent apoptosis of Caki cells, while the treatment of VLB+NVP-BEZ235 significantly enhanced apoptosis rate to about 60% in a concentration-dependent manner. The apoptosis-inducing activity of VLB+NVP-BEZ235 was correlated with the up-regulation of Caspase-3 and down-regulation of Mcl-1.Conclusions The combination of VLB and NVP-BEZ235 can induce apoptosis of human renal cell carcinoma cells, which is related to the up-regulation of Caspase-3 and down-regulation of Mcl-1.

       

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